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微生物限度檢測膜過濾法的介紹

更新時間:2025-10-29  |  點擊率:314

 微生物限度檢測是一種在生物制藥、醫療器械、化妝品企業、食品飲料、醫療疾控、第三方檢測、檢驗檢疫等單位機構中廣泛進行的,主要是用來評估藥品、食品飲料、生物制劑、化妝品、醫療器械等產品中微生物污染程度的質量控制方法。可以檢測樣品中需氧菌、霉菌、酵母菌總數,以及特定致病菌——如大腸桿菌、沙門氏菌、金黃色葡萄球菌等特定病原微生物的存在,目的是確保產品中的微生物數量在安全范圍內,避免對消費者和使用者健康造成危害。更具體的來講,在制藥行業,能確保無菌或微生物限度,符合中國藥典、美國FDA等各國藥品監督的要求;在食品飲料生產時,保障出廠的產品安全,防止微生物污染印發的健康風險;在化妝品企業,確保產品微生物指標符合衛生標準規范。

        進行微生物限度檢測的主要幾種方法有以下幾種:平皿計數法,直接通過培養基培養并計數微生物;最可能數法,是通過統計方法估算微生物數量;快速檢測法,如PCR、ATP生物發光法等,用于快速篩查;膜過濾法,適用于液體樣品,過濾后培養并計數。

        在上述幾種方法中,平皿法通常用于不可過濾的固體或高黏度樣品,或者少量的濾液(10ml以下);最可能數法由于通過統計的方法估算的數值,結果準確度低。 目前使用廣泛的是膜過濾法,其在微生物檢測中具有顯著優勢。其原理是將一定量的待檢測液體樣品,倒入過濾杯中,使用真空泵產生的負壓吸引力,使液體能通過濾膜,微生物被截留在膜上,然后將濾膜置于培養基上培養,最后計數形成的菌落。所以濾膜法能夠富集樣品中的微生物,即使微生物濃度很低(如1 CFU/100mL),也能通過增加過濾液體的總容量來提高檢測靈敏度。

      在具體準備過濾裝置時,應當注意過濾裝置的聯數,聯數是指單次可以同時過濾的樣品數量。例如R300B單聯微生物檢測抽濾裝置,采用的是常規的上方過濾漏斗,連接底部集液瓶的結構形式,濾液通過濾膜后直接流入底部試劑瓶待實驗結束后處理,抽濾瓶帶有接口連接真空泵來進行抽氣形成負壓吸引力。單聯過濾裝置結構簡單,整體尺寸小巧,占用空間少,每次過濾一組樣品,較為適合檢測樣品量不大的用戶。

       而針對大型企業,或者是疾控、第三方檢測等單位,由于檢測樣品數量多,如果每次只能過濾一組樣品,效率低下。這時候就可以使用多聯過濾系統,它是通過一組使用金屬材質制作的過濾支架,將多組過濾杯連接起來,使其可以通過同一臺真空泵來抽氣產生負壓吸力。典型的如BV-321-A三聯式和BV-621A六聯式微生物限度檢測真空抽濾系統,可以同時過濾3組或6組樣品。支架采用耐腐蝕的陽極鋁合金材質制作,對應插入3或6支過濾漏斗,漏斗中間放置濾膜。支架側邊帶有接口連接一個大容量的集液瓶,濾液通過濾膜后流入集液瓶內暫存,集液瓶底部帶快速排液口,瓶滿后松開排液管夾可以快速導出濾液,不需要停下工作打開集液瓶蓋的繁復操作。集液瓶的頂部有2個接口,一個連接支架、另一個接抽濾泵,這樣即可以實現1臺泵搭配1只集液瓶,同時處理數個過濾漏斗內的樣品,大幅提升過濾效率。

       在選擇合適的機型后,具體進行檢測大致包含以下步驟:

1. 準備濾膜:選擇合適的濾膜并滅菌,也可以直接選購已經伽馬射線(輻照)滅菌的無菌包裝過濾膜。濾膜材質通常推薦使用MCE混合纖維素材料。直徑根據過濾裝置的漏斗大小來選擇,一般為47或50mm較為常見。空間根據需要檢測的微生物來覺得,一般為0.22或0.45微米。推薦使用帶網格線的過濾膜,便于計數時的觀察。

2. 過濾樣品:將液體樣品通過濾膜過濾,微生物被截留。具體根據選擇的過濾裝置型號參加說明書操作。

3. 轉移濾膜:將濾膜移至適當的培養基上。

4. 培養:在適宜條件下培養,使微生物生長。

5. 計數:培養結束后,計數濾膜上的菌落數。


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